引言

肝细胞癌（HCC）具有侵袭性强、发病率及病死率高，预后较差等特点，是最常见的恶性肿瘤之一。而恶性腹水是晚期肝癌腹膜转移的严重并发症，门静脉癌栓形成（PVTT）经常导致腹水、门静脉高压和肿瘤转移，是预后不良的征象之一。恶性腹水与良性腹水的鉴别一直是临床难题，寻找特异性标志物是研究的“热点”之一。有研究报道肝硬化（LC）患者腹水的微生物组成与短期临床结局相关。然而，目前还没有关于HCC合并恶性腹水微生物群的相关研究。

近日，武汉大学人民医院消化内科董卫国教授团队及华中科技大学同济医学院附属协和医院田山博士等人连发两篇文章，均是基于HCC合并恶性腹水样本研究微生物群及微环境相关性，为HCC合并恶性腹水的治疗提供了新视角，具有重要的临床治疗意义。

第一篇：mBio

2024年4月2日，武汉大学人民医院消化内科董卫国教授团队的郭颖韵博士及华中科技大学同济医学院附属协和医院田山博士等人在中科院生物学1区TOP期刊 mBio上的“Ascitic microbiota alteration is associated with portal vein tumor thrombosis occurrence and prognosis in hepatocellular carcinoma”的研究论文[1]，主要研究肝细胞癌腹水中菌群改变与肝癌门脉癌栓发生及预后的关系。

本研究旨在探索HCC合并恶性腹水患者的微生物菌群的改变，旨在更好地了解腹水微生物群与HCC继发腹水PVTT之间的相互作用，并提出潜在的未来发展方向。本研究共纳入240例患者（HCC伴恶性腹水（MA）196例，其中155例有腹水样本；肝硬化（LC）伴良性腹水（BA）44例，都有腹水样本），观察合并和不合并PVTT患者腹水微生物及生化指标的变化；探究恶性腹水患者中PVTT状态与免疫细胞之间的相关性。

图1. 患者筛选及分组流程图

目前关于PVTT与肿瘤微环境关系的报道较少，本研究通过艾克发生物的多重免疫组化mIHC技术比较两组间不同免疫细胞的表达情况（WVT，n = 15；NVT，n = 9），5种标志物检测不同免疫细胞的表达（Panel：CD8，CD23，CD20，PANCK，DAPI）。通过可视化图片及相应结果进行统计分析，结果显示WVT组和NVT组之间的CD8+T细胞、CD23+、CD20+和PANCK+细胞密度无显著差异（图2和图3）。

图2. 肝癌患者恶性腹水中肿瘤微环境的mIHC图像（Panel：CD8，CD23，CD20，PANCK，DAPI）

图3. WVT和NVT组四种免疫细胞的定量分析。WVT组和NVT组的组织中(A) CD8 + T细胞、(B)CD23+细胞、(C) CD20+细胞、(D) PANCK+细胞的密度均无显著性差异。

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这是第一个基于FFPE样本研究HCC合并恶性腹水与LC继发良性腹水微生物组差异的临床研究。通过肝细胞癌HCC和肝硬化LC患者的微生物群探讨了腹水生态系统的改变，发现二者的微生物组存在显著差异；并首次通过16S rRNA测序研究发现肝癌是否合并门静脉癌栓两组之间的微生物多样性也存在差异，结果揭示HCC伴有PVTT患者的微生物多样性减少和代谢失调，肝细胞癌腹水中γ变形杆菌和不动杆菌含量最高。因此，微生物组分析可以帮助预测PVTT形成，并可能为更好地了解HCC患者PVTT的治疗提供重要基础，这对临床治疗具有重要意义，为肝癌合并恶性腹水的治疗提供了新的视角。

第二篇：Int Immunopharmacol

同月27日，以田山博士为第一作者，董卫国教授和郭春霞教授为共同通讯作者，研究团队在中科院医学2区TOP期刊Int Immunopharmacol上发表“Association between ascites Gustave Roussy immune score and the intratumoural microbiome in malignant ascites secondary to hepatocellular carcinoma”的研究论文[2]，该研究确定了一种新的评分系统（aGRIm评分）来预测HCC合并恶性腹水患者的生存结果。

Gustave Roussy免疫（GRIm）得分最初用于实体瘤免疫治疗的1期临床试验的预后评估，但在恶性腹水患者中的预后意义尚未被研究。

本研究旨在比较血清GRIm（sGRIm）和腹水GRIm（aGRIm）评分在HCC合并恶性腹水患者中的预后意义，并探讨GRIm评分与HCC合并恶性腹水患者肿瘤内微生物改变之间的相关性，以便阐明肝癌继发恶性肿瘤中肿瘤内微生物群与免疫细胞之间的相互作用。

本研究依据血清GRIm（sGRIm）和腹水GRIm（aGRIm）评分，将纳入的155例HCC合并恶性腹水患者样本分为低和高评分组。采用生存分析比较sGRIm和aGRIm评分的预后意义，分析显示，与sGRIm评分相比，aGRIm评分具有更好的预后意义；通过16S rRNA测序分析微生物组成，低aGRIm评分组的细菌丰富度和多样性高于高aGRIm评分组。LefSe分析显示某些细菌与较高的aGRIm分数相关。mIHC显示恶性腹水肿瘤微环境中，低aGRIm评分组CD8 + T细胞密度明显高于高aGRIm评分组。

为了确定GRIm评分与肿瘤微环境之间的关系，本研究利用艾克发生物的mIHC技术平台，通过标记恶性腹水中6种标志物来检测不同免疫细胞的表达（AE-09 Panel：CD8，CD23，CD20，PDL1，PD1，PANCK，DAPI）。通过可视化图片及相应结果进行统计分析（图4）。统计析显示，低aGRIm评分组的CD8+ T细胞密度明显高于高aGRIm评分组（图5）。未来将采集更多的恶性腹水样本，进一步验证恶性腹水的免疫微环境。

图4. HCC腹水样本中mIHC代表性图像（AE-09 Panel：CD8，CD23，CD20，PDL1，PD1，PANCK，DAPI）。A.不同颜色代表的标志物；B.低aGRIm评分组的视野；C. 高aGRIm评分组的视野。

图5. 高/低aGRIm评分组中各标志物的定量比较（*表示P value=0.0359）

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本研究确定了一种新的评分系统（aGRIm评分）可以预测HCC合并恶性腹水患者的生存结果。微生物组分析显示，在aGRIm评分低组和高组之间存在不同的微生物多样性和显著的肿瘤内微生物群。mIHC显示了恶性腹水的肿瘤微环境，并提示恶性腹水的aGRIm评分与CD8+ T细胞呈负相关。

 

总结与展望 →

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参考文献：

1. Guo Y, Tian S, Zhan N, et al. Ascitic microbiota alteration is associated with portal vein tumor thrombosis occurrence and prognosis in hepatocellular carcinoma. mBio. 2024;15(5):e0024524. doi:10.1128/mbio.00245-24

2. Tian S, Guo Y, Lan Q, et al. Association between ascites Gustave Roussy immune score and the intratumoural microbiome in malignant ascites secondary to hepatocellular carcinoma. Int Immunopharmacol. Published online April 26, 2024. doi:10.1016/j.intimp.2024.112097